多功能酶标仪如何进行灵敏度和正确度的监测?
加入时间:2014-06-10 11:35:51 当前新闻点击率:3265
现阶段的酶标仪在我国各医院及科研单位的应用已经非常广泛,目前可用于多种疾病及物质检测,如三氯氰胺等。为有效保证检测数据的准确性,医疗设备的灵敏度是非常重要的,那么多功能酶标仪如何进行灵敏度和正确度的监测?
方法:①灵敏度:精确配制6 ug/ml重铬酸钾(干燥)溶液(0.05 mo1/L硫酸溶解),加进200 ul重铬酸钾溶液于小孔杯中,以0.05 mo1/L硫酸溶液作空缺,于450 nm(参比波长650 nm)测定,其吸光度应≥ 0.01 A。②正确度:正确配制:1mmo/L对硝基苯酚(提纯品)水溶液,然后以10 mmo1/L氢氧化钠溶液25 倍稀释之,加进200 ul稀释液于小孔杯中,以10 mmo1/L NaOH溶液作空缺,于405 nm(参比波长650 nm)检测,其吸光度应在0.4 A(0.395~0.408 A)左右。
医疗设备的灵敏度和正确度主要受两个因素影响:一是滤光片波长的精度,二是检测器的质量。通常情况下,滤光片原因导致仪器的灵敏度和正确度下降比较轻易检查;而检测器质量差异则不易被发现,因此我们采用上述两种标准物质溶液对仪器检测器的质量进行定期监测,从而保证了仪器检测结果的可靠性。对于仪器正确性的测定,我们采用了文献报道的方法,经过多次在不同型号仪器间进行反复测定,结果发现该标准物溶液在450nm波优点有一较为恒定的测定值,由于酶标仪与其它分光光度计的光学原理不完全相同,故是否可以作为评价酶标仪正确性的参考方法还有待同行进一步研究考证。
通道差与孔间差检测
方法及其表达方式:①通道差检测:取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑、透明、无划痕、无污染)以酶标板架作载体,分别加进三种不同浓度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8个通道的相应位置,蒸馏水调零,采用双波长(测定波长490nm,参比波长630或650nm,以下均相同)连续测三次,观察其不同通道之间丈量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。②孔间差的丈量:选择同一厂家、同一批号酶标板条(8条共96 孔)分别加进200 ul甲基橙溶液(吸光度调至0.065~ 0.070 A)先后置于同一通道,蒸馏水调零,采用双波长检测,其误差大小用±1.96s衡量。
理论解释:为了进步酶标仪的检测速度,根据 96孔酶标板的规格特点,目前大多数厂家的中、高档酶标仪均采用8通道的检测器(部分中、低档酶标仪目前仍采用单通道).因而它们每个通道的检测能力是不尽相同的,它是仪器内部的固有误差,与所测溶液浓度成正相关(不同检测器对不同浓度溶液的响应能力不同),所以通道差是衡量酶标仪性能良好与否的重要指标之一;其衡量指标用极差表示,这与厂家推荐的指标是一致的;极差值越接近于零,通道差越小,说明同一样品于不同通道检测结果的一致性越好。