华体汇赞助|登陆活动网站 
搜索
电话
400 696 6267
热门搜索
生化分析仪-样品量、试剂量与稀释量设置方法
加入时间:2014-05-14 15:07:25  当前新闻点击率:4051

    生化分析仪有关参数包括样品量、试剂量、稀释水量、最小反应体积和最大比色杯容量等。如HITACHI7170反应体积180~380μl,最大体积570μ l。BT 224半自动生化仪流动比色池容积33μl,吸液量200~990μl,最适体积500μl。

    1.最小反应体积   在医疗设备光度读数要用于结果计算时,反应液液面高度不低于光度计光径的最小体积。它保证仪器的正确读数和计算,也是仪器测定精度和经济性的指针之一。在有的仪器中,它以反应体积的下限表示,有的则专门标明最小反应体积。在单试剂测定中,样品与试剂的总体积不得少于此参数。在双试剂测定中,若R1与样品的反应读数不纳入结果计算。R1自勺加液量可不考虑此参数,如连续监测法;否则应考虑它对结果的影响,如终点法在加R2之前读数,并以此来扣除试剂或样品空白时。

    在半自动生化仪中,最适吸人量相当于最少反应体积。它与进液管道长度、流动比色池容积,吸液泵抽吸力大小和液体黏稠度有关,它要保证光度检测不受空泡和前后样品携带污染的干扰。因此,吸人体积不能任意降低,必要时,应加大反应液量和吸人量。

    2.最大比色杯容量   这个参数含义明确。在有的仪器中,它以反应体积的上限表示,有的则专门标明最大比色杯容量。反应液超过此体积,将致液体外溢,仪器测定系统被污损。

    3.样品试剂比例样品与试剂的比例(SV:RV),也可表示为样品体积分数——样品体积与反应液总体积的比值(SV/TV),是方法学基本参数。酶活力测定中,样品在总体积中的比例应在10%以下。一般来说,待测物质在样品中含量低的、生理波动范围大的,样品用量较大。如Trinder反应测定血清葡萄糖、胆固醇等,样品试剂比例多为1:1OO,测定血尿酸或高密度脂蛋白胆固醇,常增加为1:50;ALT和AST的样品试剂比例多为1:1O至1:20。方法灵敏、吸光度高的实验方法,样品试剂比例小,如白蛋白BCG法,样品试剂比例常为1:200。肌酐Jaffe氏法监测时间短、吸光度值较低,样品试剂比例多为1:10。一般应以试剂说明为准,不宜轻易改动。

    (1)改动样品试剂比例,影响一系列方法学参数。若比例增大,则线性范围缩小,线性反应时间缩短,样品内源性干扰、基质效应增加、旁路反应会增强,方法特异性也下降。若比例减少,检测信号偏低,信噪比(噪音/信号)增大,当仪器精度不高时,会加大测量误差。

    (2)改动样品试剂比例,对某些反应有影响。如碱性磷酸酶(AI_P),有文献报道:当样品试剂比例从1:25降至1:50时,酶活力测定值增加,再低于1:50时不再增加。这一效应可能是较高稀释度下AIJP多聚体解聚的结果。体液样品稀释也可能对测定结果产生影响:④大多数蛋白质在浓溶液中的分子构象比稀溶液中稳定,样品稀释可影响酶的稳定性。(2)降低样品中内源性抑制剂或激动剂的浓度,如以蒸馏水稀释血清,可能因降低血清中淀粉酶的激动剂氯离子的浓度,致测定淀粉酶结果偏低;随血清稀释倍数增加,肌酸激酶测定活力增加,可能与降低样品中AMt,、胱氨酸等内源性抑制剂有关。

    (3)双试剂时要兼顾R1、R2和样品三者的比例,尤其不宜改动试剂间的比例。R2要考虑仪器规定的加液最小体积,同一试剂瓶死体积下分液量小而浪费大的经济问题等。

    4.稀释(水)量在加样或加试剂时,加入去离子水或可以指定的液体。它的主要用途有两个。一是用于浓缩试剂的稀释,或样品、校准品的稀释。二是在样品加量小的时候用来冲洗样品探针,减小携带误差;但用量不宜太多,以免稀释试剂影响反应。要把稀释水量纳入样品试剂比例和反应液总体积考虑。必要时,干粉试剂复溶也要考虑此因素。


Baidu
map