血细胞分析仪是血液学常规检查必备医疗设备之一，对血液系统及其相关疾病的诊断和治疗十分重要。由于血细胞分析仪的计数结果重现性好、正确，操纵简便、快速，已成为当今临床实验室全血细胞计数的主要检测手段。但目前的自动化血细胞分析仪被以为是非直接计数的仪器，在使用时须对其进行校准，才能保证其分析结果的正确性，而校准血细胞分析仪所测参数需用相应的参考方法。

按照国际血液学标准化委员会(ICSH)的定义，参考方法是“已被清楚而确切地描述、用于某一特定检测的方法，它可以按照指定权威机构的判定，提供正确度和精密度足够高的试验数据，以对该检测的其他实验室方法进行评估。参考方法应遵循基本的计量学标准，其正确度必须通过与现有的一种确定方法相比较而确定，并且必须明确指出其不精确度和不正确度”。除用于评价常规方法和校正仪器外，参考方法也可用于质控品定值及鉴定商品试剂盒等。与常规方法相比，参考方法的干扰因素少，系统误差小，相对于常规方法可忽略不计，因其技术要求较高且用度较昂贵，在常规临床实验室应用未几，但对保证常规方法结果的可靠性非常重要。目前，ICSH和美国临床检验标准化委员会(NCCLS)已经建立了红细胞和白细胞计数、血红蛋白测定、红细胞压积测定、网织红细胞计数、血小板计数及白细胞分类计数的参考方法。现对这些参考方法及其应用予以简述。

红细胞和白细胞计数传统的参考方法是直接计数法，即在计数池内对稀释血液进行的红细胞和白细胞直接计数。由于血液稀释的正确性和充池的一致性不易把握，结果会产生较大的误差，且当细胞浓度过低时难以得到正确的结果。该法在一般临床实验室中计数红细胞的不精密度（CV）可达5%~10%，而在生理条件下计数白细胞的CV值为6％－9％，已不适于作为参考方法。ICSH推荐使用电阻抗法半自动单通道细胞计数仪计数代替传统的直接计数法，并在1994年对此进行了修订，将其确定为参考方法。

现行红细胞和白细胞计数的参考方法，是将血液稀释一定倍数后用ICSH推荐的计数仪计数一定体积内的细胞数，并换算成每升血液内的细胞数。计数白细胞时，用白细胞稀释液溶解红细胞。标本是用EDTAK2抗凝的静脉血，EDTAK2的终极浓度为1.5－2.2mg/ml。测定时不能用溶血或有微凝块的标本。同时，盛血容器体积要合适，以有足够的空间混匀血液。测定前将容器轻轻倒转几次混匀血液，但不能用旋涡混匀器。计数仪通道直径80－100μm，通道长度为直径的70%－100%，仪器信噪比大于100:1。

稀释标本时应使用符合国家标准的容量瓶，计数白细胞时要用稀释液将红细胞完全溶解。除标本采集，标本运输及标本稀释可使结果产生误差外，丈量时的误差来源主要包括吸进血液的体积不准、通道内细胞再循环、细胞粘附、假信号以及重合计数等。重合计数为主要的误差来源，目前多通过回回分析方法进行校正，假信号则通过设置阈值进行消除。