随着科技的不断发展，血红蛋白测定的方法很多，包括比色法、比重法、血铁法、血氧法等，其中以比色法为主，其实这也是血细胞分析仪的发展史。1966年ICSH就已推荐氰化高铁血红蛋白（HiCN）法为血红蛋白测定的首选方法，既作为参考方法，也可常规使用。采用该法的医疗设备精确度和正确度都很高，最大答应误差为1%，其他方法如十二烷基硫酸钠测定法、叠氮高铁血红蛋白法等都必须通过HiCN法校正其结果。以后ICSH又多次重申了该法。

    HiCN法是用HiCN转化液与血红蛋白反应，除硫化血红蛋白（SHb）外，其他血红蛋白都被高铁氰化钾转化成高铁血红蛋白（Hi），Hi再与氰离子反应天生HiCN，该物质有特征性吸收光谱，540nm处为最大吸收峰，在标准条件下，其吸光系数一定，用标准化的分光光度计测HiCN液的吸光度再换算成血红蛋白浓度（g/L）。

    HiCN法必须待溶血和转换反应进行完全后才能进行测定，否则所得结果偏低。同时，测定前还要将HiCN溶液过滤，以除往颗粒杂质，并对所使用的分光光度计以HiCN标准液进行校正，这是测定的关键之一。目前所用的国际HiCN标准液按Holtz制定的方法制备，其浓度为550~850mg/L，保持清洁无菌,性质稳定，其吸收光谱特征符合国际HiCN参考品的要求。