血小板计数的干扰因素较多。细胞碎片、颗粒杂质、血小板聚集等都可对血细胞分析仪检测结果造成偏差。血小板计数传统的参考方法是目视计数法，即将血液用草酸铵溶液稀释后，充进牛鲍计数板，在相差显微镜下计数血小板。该种检测方法的重现性差，变异系数（CV）可达10%－25%，已不适于先阶段血细胞分析仪的使用，单通道粒子计数仪由于重合计数和干扰信号的影响较大，常使结果偏高（特别是在低血小板时），也不适于作为参考方法，这一度成为医疗设备发展的难题。

近年来，对血小板计数方法的研究较多，建立正确度及精密度更高的血小板计数的参考方法，不仅可进一步发展血细胞分析仪仪，还可减少临床上预防性输注血小板的应用。不少学者以为，假如血小板计数结果可靠，进行血小板输注的阈值可由目前的20×109/L降至5×109/L，这可大大减少血小板输注的用度。

Dickerrhoff等研究了以乳胶颗粒作为校准物计数血小板的方法，即用单克隆抗体标记血小板，在一定量血液中加进一定量荧光素（FITC）标记的乳胶颗粒，用流式细胞仪计数血小板对乳胶颗粒的比值，再以该比值乘以已知的乳胶颗粒的浓度即为血小板浓度。该法正确度和精确度较高，CV值为5.3%－5.6%，但在吸取和稀释标本、加进乳胶颗粒时，需要正确吸样，否则会带来操纵误差。

    现行的血小板计数的参考方法是ICSH制定的PLT/RBC比值法，即以红细胞代替乳胶颗粒作为校准物，计数PLT/RBC值，通过ICSH参考方法计数红细胞浓度，再以PLT/RBC比值乘以红细胞浓度即为血小板浓度。PLT/RBC比值法相对较易进行，其主要优点在于，对一个混匀的血标本，吸样和稀释标本不会使结果产生误差。一般以为，标本作1:1000稀释，流式细胞仪测定3000个信号/秒时，为血小板计数的最佳条件，并可不进行重合计数的校正。

    目前标记血小板所用的单克隆抗体包括抗CD41a(GPⅡb/Ⅲa) 、抗CD41(GPⅡb)、抗CD42a(GPⅠb/Ⅸ)、抗CD42b(GPⅠb)、抗CD61(GPⅢa)等，由于GPⅠb/Ⅸ在血小板激活时会转进血小板开放管道系统，而导致其在血小板膜上的分布减少，这限制了CD42a和CD42b的应用。而GPⅡb/Ⅲa性质较稳定，很少发生再分布，其两个抗原决定簇也很少同时被封闭，故目前一般同时使用抗CD41和抗CD61对血小板进行标记。在标记的血小板中，较大的血小板团可根据前向和侧向光散射特征加以区分。

    计数血小板所用容器应当用聚丙烯或聚苯乙烯材料，以避免血小板粘附，所用流式细胞仪要能同时进行光散射和荧光丈量。之所以要通过PLT/RBC比值计数血小板，是由于目前流式细胞仪还只能对细胞进行相对计数，而不能进行尽对计数。